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原理 过氧化氢酶广泛存在于植物的所有组织中，能将过氧化氢分解为氧和水，可使生物机体免受过氧化氢的毒害作用。测定过氧化氢酶的方法有测压法、滴定法以及分光光度法等。用氧电极法测量放氧速度，方法灵敏而快速。放氧速度与过氧化氢酶活性成正比。 仪器药品 氧电极仪 记录仪 电磁搅拌器 超级恒温水浴 注射器、 微量注射器 容量瓶 反应杯 亚硫酸钠 过氧化氢酶 50mmol/L磷酸缓冲液，pH7.0（见附表2）。 50mmol/L过氧化氢溶液：取1.4ml30%H2O2用磷酸缓冲液定容至250ml即得。 标准过氧化氢酶溶液：称取过氧化氢酶(Sigma)1.0mg(110U/mg)，溶于50mmol/L磷酸缓冲液(pH7.0)11ml中，使酶浓度为10U/ml。 操作步骤 1．仪器的标定 按实验88步骤进行仪器的标定，以求得记录纸上每小格相当的含氧量。 2．绘制酶活性标准曲线 (1)在反应杯中放满过氧化氢磷酸缓冲液，开启电磁搅拌器搅动10分钟，插入电极，吸去溢出在电极外面的溶液，调节移位旋钮，使记录笔位于满刻度的10─20%左右，使记录纸走动，1─2分钟后温度达到平衡，记录笔画出直线。 (2)用微量注射器从电极塞小孔中注入10μ110U/ml过氧化氢酶，立即记录最初90秒钟内的氧释放曲线。 (3)根据上述同样步骤，注入不同浓度的过氧化氢酶10μl（例如浓度为20、30、40、50U/ml等），记录氧释放曲线。 (4)取放氧曲线的直线部分，根据其斜率及走纸速度，计算每分钟氧的释放量。 (5)以过氧化氢酶活性单位为横坐标，每分钟氧的释放量为纵坐标，绘制标准曲线。 3．样品测定 (1)在反应怀内注入50mmol/L过氧化氢磷酸缓冲液搅动10分钟，插上电极，待记录为一直线后，注入10μl合适浓度的待测酶液样品，立即记下最初90秒钟内的放氧曲线。 (2)根据样品的放氧曲线，计算得到每分钟的放氧量，在标准曲线上查得酶活性大小。 (3)如果没有标准的过氧化氢酶，不能计算酶活性单位时，也可以用每分钟的放氧量相对地表示酶的活性大小。 (责任编辑：admin) |