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“DNA的粗提取与鉴定实验”分类比较


    一、不同试剂用途及原理比较
    
试剂 浓度 用    途 原理(“△”为实验的主要原理)
NaCl 溶液 2mol/L 溶解DNA DNA在氯化钠溶液中的溶解度随溶液浓度的变化而改变,溶解度在2mol/L时最大、0.14mol/L时最小
0.14mol/L 析出DNA
0.015mol/L 鉴定时的溶媒 该浓度下也能溶解DNA  
酒精 95%(体积分数) 除杂以提纯DNA DNA不溶于酒精,但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液
二苯胺   鉴定剂 DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色
柠檬酸钠 0.1g/mL 抗凝剂 除去血液中的钙离子,防止血液凝固  

    二、方法步骤比较
    
项目 方法步骤 添加物质及目的 操作要求及目的
取用与要求 目的 要求 目的
制备鸡血细胞液(教师准备) 取0.1g/mL的柠檬酸钠100mL于500mL烧杯中,加鸡血180 mL 抗凝 缓慢搅拌 混匀血液与柠檬酸钠,防血凝
离心或置于冰箱 使血细胞与血浆分离
1.提取鸡血细胞的细胞核物质 20mL蒸馏水 促进血细胞吸水破裂,释放核物质 搅拌:单向、快速、5min 加速血细胞破裂
过滤:1-2层纱布 滤取含DNA的滤液
2.溶解细胞核内的DNA 2mol/L的 NaCl溶液40mL 溶解DNA 搅拌:单向、缓慢、1min 促进DNA溶解
3.析出含DNA的黏稠物 加蒸馏水至黏稠物不增加为止 降低NaCl溶液浓度,析出DNA 搅拌:单向、轻轻 混匀溶液,促进析出完整DNA分子
4.滤取含DNA的黏稠物     3层~4层纱布过滤 获取含DNA的黏稠物
5.将DNA的黏稠物再溶解 2mol/L的 NaCl 溶液20mL 再溶解DNA 单向搅拌 使黏稠物尽可能多地溶解于溶液中
6.过滤含有DNA的氯化钠溶液     3层~4层纱布过滤 滤取含DNA的滤液
7.提取含杂质较少的DNA 加入冷却的、体积分数为95%的酒精50mL 让部分杂质溶于酒精,析出含杂质较少的DNA 搅拌:单向 促进杂质溶解、DNA析出
用玻璃棒卷起丝状物,用滤纸吸水 获得DNA(白色乳状丝状物)
8.DNA的鉴定 向2支20 mL试管各加0.015mol/L的NaCl溶液 一支对照,一支溶解DNA(作溶媒) 搅拌 促进DNA溶解
各加4mL二苯胺试剂 作为DNA鉴定剂 沸水浴5 min,冷却观察颜色 DNA所在试管溶液变蓝色

        三、DNA的粗提取和鉴定实验中应注意的问题 1.盛放鸡血细胞液的容器,最好是塑料容器。因为鸡血细胞破碎后释放出的DNA,容易被玻璃容器吸附,细胞内DNA的含量比较少,如果被玻璃窖吸附却一部分,提取的DNA就会更少。因此,实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管,这样可以减少提取过程中DNA的损失。 2.获取较纯净的DNA的关键步骤。 ⑴充分搅拌鸡血细胞液。DNA存在于鸡血细胞的细胞核中。将鸡血细胞液与蒸馏水混合后,必须用玻璃棒沿一个方向快速搅拌,使鸡血细胞加速破裂,并释放出DNA。 ⑵沉淀DNA时必须用冷酒精。实验前必须准备好大量的体积分数为95%的酒精,并在冰箱中至少存放24h。 ⑶正确搅拌含有悬浮物的溶液。实验步骤3、5、7都需要用玻璃棒搅拌。在进行步骤3、5时,玻璃棒不要直接接触烧杯底部,而且搅拌要轻缓,以便获得较完整的DNA分子。进行步骤7时,要将玻璃棒插入烧杯中溶液的中间,用手缓慢转动5min~10min。 3.本实验中鉴定DNA的方法为二苯胺法。如果在没有二苯胺的情况下也可以用以下几种方法。 ⑴配制染色剂。用蒸馏水配制0.05%的溴化乙锭(EB)溶液。 ⑵将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上,再滴1滴EB溶液染色。 ⑶将蜡纸放在紫外灯(260nm)下照射(暗室中),可见橙红色的荧光(DNA的紫外吸收高峰在260nm处)。 4.典例解析 1.下列关于“DNA的粗提取与鉴定”的实验原理中,说法错误的是 A.DNA在氯化钠溶液中的溶解度随溶液浓度的变化而改变 B.利用DNA不溶于酒精的性质,可除去细胞中溶于酒精的物质而得到较纯的DNA C.DNA是大分子有机物,不溶于水而溶于某些有机溶剂 D.DNA溶液中加入二苯胺试剂经沸水浴后会出现蓝色反应 解析:该实验依据的原理是A、B、D,DNA不溶于酒精(属有机溶剂),C说法错误。 答案:C 2.下列关于实验操作的说法中,有误的是(    ) A.该实验中有两次加入蒸馏水,均是为了析出DNA B.该实验学生操作中多次用到搅拌,除最后一步未强调方向外,其余均要求单向搅拌 C.该实验中有3次过滤,过滤时使用纱布层数与需用滤液或黏稠物有关 D.实验三次加入NaCl溶液,无论浓度是2mol/L,还是0.015mol/L,均是为了溶解DNA 解析:对照比较表可知,除A说法有误外,其余各项均正确。两次加蒸馏水,第一次是为了使细胞吸水破裂释放出核物质(DNA),第二次是为了降低NaCl溶液的浓度从而析出DNA。 答案:A 3.填写本实验操作过程中所用试剂。 ⑴提取鸡血细胞中核物质:               ; ⑵溶解核内DNA:               ; ⑶析出溶液中的DNA:               ; ⑷DNA粘稠物的再溶解:               ; ⑸提取杂质较少的DNA白色乳状丝状物:               ; ⑹鉴定DNA是否存在可用试剂:               。 解析: ⑹鉴定DNA是否存在常用:二苯胺试剂沸水浴为蓝色反应;也可选用甲基绿试剂,其颜色反应为蓝绿色。(其它略) 答案:⑴蒸馏水 ⑵2mol/L NaCl溶液 ⑶蒸馏水 ⑷2mol/L NaCl溶液 ⑸冷却的体积分数为95%的酒精 ⑹二苯胺试剂或甲基绿试剂
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